细胞培养与传代步骤

918博天堂提供专业的细胞培养解决方案，本文将详细介绍细胞的培养、传代及冻存方法，以确保实验室细胞的质量和活性。

培养条件

细胞培养应在以下条件下进行：

• 气相：95%空气 + 5%二氧化碳
• 温度：37℃
• 培养基：MEM + 10% FBS + 1% P/S

细胞传代方法

首次传代建议比例为1:2，具体情况可根据细胞生长情况调整。

传代时，每两天更换培养液，以维持细胞最佳状态。

细胞处理步骤

收货后，应立即对细胞进行处理。先用75%酒精消毒细胞瓶，确保操作环境的无菌。然后，将细胞瓶放置在37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态，之后进行后续处理。

细胞观察与记录

使用显微镜观察细胞生长情况，并拍照记录（建议拍摄40x、100x、200x的不同倍数照片）。前三天的照片是重要的售后依据，若无照片则默认为细胞状态良好。

细胞传代步骤

对于贴壁细胞，传代步骤如下：

1. 弃去培养上清，使用不含钙镁离子的PBS冲洗1-2次。
2. 添加约1-2ml的0.25%胰蛋白酶消化液，轻轻摇晃后放入37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞状态。
3. 若细胞已大部分脱落，快速加入5ml完全培养基终止消化。
4. 轻轻吹打细胞，使其完全脱落后，吸出细胞悬液，转移至15ml离心管中，进行1000RPM离心5分钟。
5. 弃去上清，加入1-2ml完全培养基重悬后，按1:2的比例进行分瓶传代，补充新的完全培养基至每瓶5-8ml，再放入37℃、5% CO2的培养箱中培养。

悬浮细胞传代步骤

悬浮细胞的传代可采用半换液法，每次处理后静置一小时，轻轻吸出3ml培养基后补充同量的新完全培养基，避免细胞密度过高。

细胞冻存与复苏

细胞达到80%汇合度时，应进行冻存处理。使用PBS洗涤细胞后，加入0.25%胰蛋白酶消化液，观察细胞回缩后，加入5ml完全培养基终止消化。然后进行离心处理，将细胞沉淀与无血清冻存液混合，最后放入-80℃冰箱保存。

细胞复苏时，从液氮中取出冻存管，快速置入37℃水浴中解冻。解冻后，将细胞移至含有5ml完全培养基的离心管中，离心后将细胞重悬后接种至培养瓶，放入细胞培养箱继续培养。

注意事项

在运输过程中，部分细胞可能会脱落，这是正常现象。若脱落较多，应收集培养液进行处理。细胞保存和传代的步骤需小心操作，以确保细胞的活性与稳定性。

选择918博天堂进行细胞培养与实验室配件采购，能够确保您在生物医疗领域的成功与高效。