在进行Western Blot实验时，最忌讳的是什么呢？条带模糊、数据崩溃，经过一番检查，竟发现内参使用不当！简单来说，内参就像细胞内“稳定的打工人”，其表达量始终如一，专门用来校正样品量，消除误差。缺少了内参，半定量结果就像没有秤砣的秤——完全依赖于运气！

✅ 首先关注分子量——如果目的蛋白与内参相差超过5kD，条带就容易叠加在一起，形成“情侣装”。

✅ 然后检查定位——在研究核蛋白时，如果使用β-actin，那可就不对了！因为在核内根本没有它！这时更换为PCNA（29kD）或Histone H3（17kD）才能效果更佳！

✅ 组织特性也需要重视——在脂肪组织中，β-actin的表达极其低下，建议直接使用GAPDH；而对于肌肉样本，tubulin可能不太稳定，反而actin会显得更加可靠。

同一只β-actin，N端抗体可能在心肌中失踪，而C端抗体却能稳定显示条带！在购买抗体前，一定要仔细查看抗原位点，避免“组织特异性”导致的错误。

全细胞或胞浆样本可选用β-actin或GAPDH；而核蛋白则推荐PCNA或Histone H3；大蛋白可以使用β-tubulin；对于特殊样本，务必先查阅文献再下单！选择内参时得稳健，唯有如此，WB结果才会可靠！

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